O novo teste de fluxo lateral Vigilant é mais barato, fácil de usar e tão confiável quanto o atual teste PCR padrão ouro para o diagnóstico de infecção por SARS-CoV-2.
 |
| ilustração laboratório |
Um teste de fluxo lateral SARS-CoV-2 que combina duas enzimas bacterianas com sequências genéticas e um par de sondas é mais barato e mais fácil de usar do que os testes de PCR, embora produza resultados comparativamente confiáveis. Chamado Vigilant e desenvolvido pela KAUST, o teste pode detectar quantidades muito pequenas de RNA viral em uma amostra.
“Vários tipos de testes de fluxo lateral estão atualmente disponíveis ou em pesquisa para detectar SARS-CoV-2”. “Dependendo de como eles funcionam, todos eles têm desvantagens, incluindo detectar o vírus apenas alguns dias após a infecção ou produzir resultados falsos positivos e falsos negativos.” Os testes de PCR, realizados em laboratórios, produzem resultados mais confiáveis, mas são caros e requerem equipamentos sofisticados e pessoal qualificado.
“O Vigilant pode ser conduzido em ambientes não laboratoriais e é significativamente mais barato e fácil de usar do que os testes de PCR”.
A primeira etapa crítica da plataforma Vigilant envolve uma técnica chamada amplificação da polimerase de transcrição reversa-recombinase (RT-RPA) para fazer muitas cópias de uma região específica no genoma SARS-CoV-2, se existir no nariz e garganta de um paciente. Os testes de PCR também amplificam as sequências de genes virais em amostras, mas envolvem colocar as amostras em vários ciclos de alta e baixa temperatura. O RT-RPA pode ser feito à temperatura ambiente com equipamento muito mais barato e fácil de usar.
Quaisquer genes amplificados por SARS-CoV-2 no produto desse processo são marcados com uma molécula chamada biotina e, em seguida, adicionados a um tubo de ensaio contendo o complexo de detecção especialmente projetado da KAUST.
Este complexo é formado por duas enzimas. Por um lado, uma enzima bacteriana chamada Cas9 é conjugada com um guia de RNA que apenas reconhece e se liga à sequência do gene SARS-CoV-2 correspondente. Na outra extremidade, outra enzima bacteriana chamada VirD2 está ligada a uma sequência de nucleotídeos com marcação fluorescente.
Um resultado positivo ocorre quando duas linhas visíveis aparecem. A primeira linha é onde a biotina no amplicon SARS-CoV-2 se liga à estreptavidina. A segunda linha é onde a etiqueta fluorescente na outra extremidade do complexo se liga ao anticorpo da tira. Um resultado negativo aparece apenas como uma única linha causada pela ligação da etiqueta fluorescente ao anticorpo.
“Agora estamos trabalhando para tornar nossa plataforma Vigilant mais amigável, combinando-a com uma técnica de amplificação ainda mais simples”, disse o bioengenheiro Magdy Mahfouz da KAUST, que liderou a pesquisa. “Também estamos trabalhando na produção de outros testes de diagnóstico rápidos e eficientes que podem detectar ácidos nucleicos para permitir testes de ponto de atendimento para patógenos, incluindo vírus e marcadores de doenças.”
Fonte: Vigilant: An Engineered VirD2-Cas9 Complex for Lateral Flow Assay-Based Detection of SARS-CoV2
.png)
.jpg)
